The effect of freezing rumen fluid in liquid nitrogen for its use as inoculum for in vitro incubation was evaluated in a semi-continuous system. Inoculum was used immediately (RF) or frozen and then thawed and used (TW) or preincubated for 2 (TW2) or 4 h (TW4) before substrate addition. For TW4, a sugars mixture was added. Bacterial diversity was not greatly affected by the inoculum processes. There were no differences on cumulative gas production (ml/g DM) or rate of gas production (ml/g DM per h) between RF and TW along the 36 h incubation (P>0.05). Delayed inocula (TW2 and TW4) produced less gas than RF up to 12h (P<0.05), but differences in fermentation rate were only appreciable at 2, 20 and 24 h (P<0.05). Volatile fatty acids (VFA) concentration at 6 h was higher with RF than TW and TW4, being lowest with TW2 (P=0.007) whereas at 24h it tended (P=0.07) to be higher with TW than with TW2 and TW4. Butyrate and minor VFA proportions differed for RF and frozen treatments at 6 and 24h (P<0.05). Despite of this, rumen fluid frozen in liquid N behaved similarly than fresh inoculum in terms of in vitro substrate fermentation. The lower gas volume in TW2 and TW4 might be justified by soluble nutrients utilisation during the first 2 and 4h incubation.

L'effet du liquide du rumen congelé dans l'azote liquide pour son utilisation comme inoculum pour l'incubation in vitro a été évalué dans un système semi-continu. L'inoculum a été employé immédiatement (RF) ou gelé et puis dégelé (TW) ou pré-incubé durant 2 h (TW2) ou 4 h (TW4) avant l'addition du substrat. Pour le TW4, un mélange de sucres a été ajouté. La diversité bactérienne n'a pas été considérablement affectée par les manipulations de l'inoculum. Il n'y avait aucune différence sur la production cumulative de gaz (ml/g DM) ou le taux de la production de gaz (ml/g DM par h) entre le RF et le TW durant les 36 h d'incubation (P>0,05). Les inocula retardés (TW2 et TW4) ont produit moins de gaz que le RF jusqu'à 12 h (P<0,05), mais les différences du taux de fermentation étaient seulement appréciables à 2, 20 et 24 h (P<0,05). La concentration en acides gras volatils (VFA) à 6 h était plus haute avec le RF que le TW et le TW4, étant la plus basse avec TW2 (P=0,007) tandis qu'à 24 h elle a tendu (P=0,07) à être plus haute avec le TW qu'avec le TW2 et le TW4. Le butyrate et les proportions mineures de VFA ont différé pour le RF et les traitements gelés à 6 et à 24h (P<0,05). Malgré cela, le liquide du rumen congelé dans N liquide s'est comporté de la même manière que l'inoculum frais en termes de fermentation in vitro du substrat. Le volume inférieur de gaz dans le TW2 et le TW4 pourrait être justifié par l'utilisation de nutriments solubles pendant les premières 2 et 4 h d'incubation.