Cryopreservation of gametes and embryos is a key issue in the development of reproductive technologies providing the possibility to preserve genetics from rare or valuable breeds (gene banking). Long-term preservation of sperm is commonplace in cattle breeding and is being adopted in aquaculture. The progressive interest in the application of cryopreservation to aquaculture has revealed how useful this method could be in the management of fish reproduction, and moreso when it is combined with other reproductive technologies. Some of the applications, in use or under development, are: storage of sperm for handling routine in those species requiring artificial insemination (salmonids, turbot); crossbreeding programming independently of the maturation period or availability of breeders; utilization of all the sperm from species or individuals with a large production; increase of the fertile life of the individual; hybridization between species with different maturation periods... However, sperm freezing causes cellular damage and reduces sperm quality and fertility post-thaw, so careful protocols have to be developed to minimize fertility loss. In this Protocol, sea bass sperm is cryopreserved in liquid nitrogen (LN). After freezing/thawing sperm quality is assessed and compared with that of fresh sperm. Motility is evaluated following Protocol D and the percentage of viable and non-viable cells is established using fluorescent probes.

La cryoconservation de gamètes et d'embryons offre la possibilité de préserver du matériel génétique de souches ou d'espèces en danger (banque de gènes). La préservation à long terme du sperme est courante en élevage de bétail et est en cours d'adoption en aquaculture. Dans la gestion de la reproduction des poissons, l'application de la cryoconservation est d'autant plus intéressante qu'elle peut être combinée avec d'autres techniques de reproduction. Parmi ses applications on note : le stockage de sperme pour le traitement de routine chez les espèces nécessitant l'insémination artificielle (salmonidés, turbot) ; la programmation de croisement, indépendamment de la période de maturation ou de la disponibilité des géniteurs ; l'utilisation de tout le sperme à partir d'espèces ou d'individus avec une plus grande production ; l'allongement de la durée de vie fertile de l'individu ; l'hybridation entre espèces avec des périodes de maturation différentes ;... Toutefois, la congélation de sperme provoque des dommages cellulaires, réduit la qualité du sperme et la fertilité post-dégel. Des protocoles doivent être développés afin de réduire au minimum la perte de fertilité. Cette partie présente un protocole où du sperme de bar est cryoconservé dans de l'azote liquide (LN). Après la congélation / décongélation la qualité du sperme est évaluée et comparée à celle de sperme frais. La motilité est évaluée en suivant protocole D et le pourcentage de cellules viables et non-viables est établi en utilisant des sondes fluorescentes.