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Cloning stone pine (Pinus pinea L.) by somatic embryogenesis
Somatic embryogenesis (SE) is the biotechnology of propagation that enables to put multi-varietal forestry (MVF) into practice. MVF involves the use of genetically tested varieties in plantation forestry, balancing genetic gain with diversity. Embryogenic lines can be cryopreserved in liquid nitrogen while corresponding trees are tested in the field, and those showing genetic superiority can be recovered for mass production of elite plants. The SE process in pines involves the initial outgrowth of embryo-suspensor masses (ESM) from immature zygotic embryos, the establishment of embryogenic cultures capable of further differentiation into somatic embryos, and their germination as somatic seedlings. We reported plant regeneration by SE in stone pine, and further research is in progress to improve the efficiency of the several steps. Induction was obtained at very low frequency (0.4%), and the best embryogenic line and maturation condition yielded 220 mature embryos per gram of ESM. Germination was achieved at 70%, and 35 % of somatic embryos were converted into plants. Suspension cultures offer advantages over semisolid cultures for mass propagation. The establishment of ESMs of stone pine in liquid medium is reported, and the recovery of mature embryos from tissues grown in liquid culture is also described. Current main bottlenecks of SE for implementing MFV in stone pine are the low induction rates and the cessation of growth of converted somatic seedlings.
L'embryogenèse somatique (ES) est la biotechnologie de propagation qui permet de mettre la culture forestière multi-variétale (FMV) en pratique. La FMV implique l'utilisation de variétés génétiquement testées en plantation en exploitant au mieux l'équilibre entre le gain génétique et la diversité. Les lignées embryogènes peuvent être cryoconservées dans l'azote liquide, tandis que les arbres correspondants sont testés sur le terrain. Ceux qui montrent une supériorité génétique sont sélectionnés pour la production en masse de plants d'élite. Le processus d'ES du pin implique la croissance initiale des masses d'embryons et de suspenseurs (ESM) à partir d'embryons zygotiques immatures, l'établissement de cultures embryogènes capables de différenciation en embryons somatiques matures, et la germination de ceux-ci. Nous présentons la régénération des plantes de pin pignon par ES et les recherches qui sont en cours pour améliorer l'efficacité des différentes étapes. L'induction a été obtenue à très basse fréquence (0,4%). La meilleure lignée et le meilleur traitement de maturation ont fourni 220 embryons matures par gramme d'ESM. La germination a atteint 70%, et 35% des embryons germés se sont convertis en plantes. Les cultures en suspension offrent des avantages par rapport aux cultures sur milieux semi-solides pour la propagation en masse. L'établissement d'ESM en milieu liquide et l'obtention d'embryons matures de pin pignon à partir de ces cultures sont décrits. Les principales étapes limitantes de l'ES pour mettre actuellement en application la FMV pour le pin pignon sont les faibles taux d'induction et l'arrêt de croissance des plantules somatiques.
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Mots-clés
AGROFORESTERIE, AMELIORATION DES PLANTES, CLONAGE, CULTURE IN VITRO, EMBRYOGENESE SOMATIQUE, MULTIPLICATION VEGETATIVE, PINUS PINEA, PLANTATION FORESTIERE, VARIETE A HAUT RENDEMENTCiter cet article
Celestino C., Carneros E., Ruiz-Galea M., Alonso-Blázquez N., Alegre J., Toribio M. Cloning stone pine (Pinus pinea L.) by somatic embryogenesis. In : Mutke S. (ed.), Piqué M. (ed.), Calama R. (ed.). Mediterranean stone pine for agroforestry. Zaragoza : CIHEAM / FAO / INIA / IRTA / CESEFOR / CTFC, 2013. p. 89-96. (Options Méditerranéennes : Série A. Séminaires Méditerranéens; n. 105). AGROPINE 2011 International Meeting on Mediterranean Stone Pine for Agroforestery, 2011/11/17-19, Valladolid (Spain). http://om.ciheam.org/om/pdf/a105/00006786.pdf